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細(xì)胞傳代培養(yǎng)的常見問題

 更新時(shí)間:2024-02-24 點(diǎn)擊量:280
  細(xì)胞培養(yǎng)幾乎是所有細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。其中,細(xì)胞傳代是將部分細(xì)胞分離出來,重新接種到新的培養(yǎng)皿中,使細(xì)胞重新獲得足夠的營養(yǎng)條件和生長空間的過程。那么你知道細(xì)胞傳代培養(yǎng)的常見問題有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!
  1、細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代
  通常當(dāng)細(xì)胞生長至w全匯合進(jìn)行傳代,避免細(xì)胞生長過密,對于特殊情況,比如有接觸抑制的細(xì)胞,一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代,避免引起細(xì)胞分化。
  2、貼壁細(xì)胞胰酶消化如何控制時(shí)間
  貼壁細(xì)胞培養(yǎng)一個(gè)關(guān)鍵步驟胰酶消化,消化過度會導(dǎo)致細(xì)胞碎片增多,細(xì)胞成片脫落,嚴(yán)重影響細(xì)胞活性,并有部分細(xì)胞漂浮,隨棄去的胰酶流失,消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下,反復(fù)吹打造成細(xì)胞損傷,活性下降。
  一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細(xì)胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要對于新購買的細(xì)胞,可以先用低濃度的胰酶去摸索一下消化時(shí)間,可每隔1分鐘鏡下觀察細(xì)胞是否變圓,記錄最佳消化時(shí)間,下一次操作參考之前的記錄來控制時(shí)間即可。
  3、如何看活細(xì)胞
  可通過顯微鏡觀察:活細(xì)胞中間透亮,飽滿,有光澤,死細(xì)胞較暗?;蛲ㄟ^臺盼藍(lán)染色來計(jì)算細(xì)胞活力,活細(xì)胞排斥臺盼蘭,因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞。有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的,可直接用計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)。
  4、細(xì)胞傳幾代開始死亡或細(xì)胞存活率不佳,增值變慢
  可能是培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳;血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳;或者消化過度,對細(xì)胞有嚴(yán)重影響;或者是傳代比例不合適;細(xì)胞存在污染等。
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